超高效液相色谱一串联质谱法同时测定焙烤食品中9种水溶性添加剂的研究（一） 同时还为了防止食品腐烂

食品添加剂主要是超高测定指在食品生产过程中，为了有效改善食品的效液相色性添色、香、谱串谱法味以及食品本身的联质品质，同时还为了防止食品腐烂，焙烤有效对食品进行保鲜及深加工而在食品中添加人工合成的食品水溶物质或者天然物质。目前，中种在中国整个焙烤食品行业的加剂究生产过程中，可以说食品添加剂是超高测定随处可见的，也都发挥着各自实际的效液相色性添作用与价值，有效提高了焙烤食品的谱串谱法质量，保存了食品的联质营养。近几年，焙烤随着民众健康意识的食品水溶提高，关于防腐剂、中种甜味剂和着色剂等食品添加剂滥用问题在媒体上讨论得越来越多。事实上，全国各地焙烤食品安全风险监测结果也显示，漂白剂、防腐剂、膨松剂及甜味剂等几类常用食品添加剂的滥用情况较为突出。

目前，已有检测甜味剂和色素类物质的标准，测定方法主要有离子色谱法（IC）、高效液相色谱法（HPIC）和液相色谱一串联质谱法（IC—MS/MS）等，其中HPLC法较为常用，但由于受到紫外检测器灵敏度的限制，甜蜜素等缺乏强紫外吸收基团的目标组分可能因含量较低而无法检出，而且该方法不能提供目标化合物的化学结构信息，在实际样品分析时容易受到基质干扰而产生假阳性现象。又各种焙烤食品的基质复杂，成分较多，容易对几种甜味剂的出峰和检测造成较大的干扰，造成假阳性或假阴性等误判的现象。同时对于食品中多组分添加剂分析，不可避免会遇到以下问题：（1）由于色谱的分辨能力有限，当样品中组分过多时，色谱手段很难将所有的组分分离；（2）对相邻的色谱峰，当保留时间相近时，仅靠保留时间对组分定性不准确和充分；（3）对于复杂基质的样品，基质的干扰仅靠紫外检测器很难进行排除。本实验结合HPLC分离能力强，分析速度快，质谱检测器（MS）定性准确、选择性和灵敏度高的特点，能在较短的时间内对于多组分进行一次性的分离和鉴定，通过梯度洗脱，利用电喷雾电离负模式，采用超高效液相色谱一串联质谱法建立一种可同时测定并能够快速、准确定性焙烤食品中9中水溶性添加剂的方法。

一、实验部分

1、材料与试剂

亮蓝、日落黄、柠檬黄、苋菜红、胭脂红和诱惑红标准溶液（0.5mg/mL，中国计量科学研究院）；糖精钠、安赛蜜、甜蜜素（纯度均大于等于98％l德国Dr．Ehrensorfer）。

乙腈、正己烷（色谱纯）、乙酸铵（分析纯）。

2、仪器与设备

ABSciexTnpleQuad5500质谱仪，配有电喷雾ESI源（ABSciex），Analyst工作站；ST一40离心机（Tllemo）lVORlEX一3涡旋振荡器（IKA）；超纯水系统（Millip0IreMilli—Q）。

3、方法

（1）标准溶液配制

准确称取糖精钠、安赛蜜、甜蜜素标准物质约10.0mg，于各自的10mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，配成1.0mg/mL的标准储备液，置于4℃冰箱中保存。

混合标准工作液：分别准确吸取适量上述准储备液配成亮蓝、日落黄、柠檬黄、苋菜红、胭脂红、诱惑红和糖精钠浓度为10mg/L及安赛蜜、甜蜜素浓度为1mg/L混合标准工作液。

（2）色谱条件

色谱柱：watersAtlantisT3（3μm，2.1mm*150mm）I流动相：乙腈（A）一20mmol/L乙酸铵溶液（B）；梯度洗脱条件：0～0.5min，5％A；0.5～3min，5％～50％A；3～5min，50％A；5～7min，50％～90％A；7～7.1min，90％～5％A；7.1～10min，5％A。流速：0.3mL/min；柱温：40℃；进样量：10μL。

（3）质谱条件

电喷雾离子源（ESI）：负离子模式采集；喷雾电压：一4500V（ESI一）；离子源温度（TEM）：600℃；气帘气（CUR）流速：35L/mim碰撞气（CAD）流速：7LA/min；锥孔气流速（Gasl）：30L/min；去溶气（Gas2）流速：30L/min；扫描模式：选择反应监测（SRM）；其他条件见表1。

（4）样品处理

准确称取2g（精确至0.01g）样品于50mL离心管中，加入20mL20％乙腈1％氨水溶液，涡旋混合1min，于50℃水浴超声20min提取，加正己烷10mL，涡旋混合1min，然后于4500r/min离心5min，弃去有机相，取2mL水相转移至离心管中，10000r/min离心5min，清液过0.22μm有机相滤膜，供上机测定。

二、结果与分析

1、流动相的优化

本方法对流动相的种类进行了考察。比较了甲醇一甲酸乙酸铵水、乙腈一甲酸乙酸铵水、甲醇一乙酸铵、乙腈一乙酸铵作为流动相时各化合物的分离情况。结果发现：甲醇体系和乙腈体系相比较，乙腈体系分离效果更好；流动相中加入甲酸后对色素的峰形和保留时间影响较大，有些峰分裂；流动相中加入乙酸铵后色谱峰峰形得到明显改善；并对乙酸铵的浓度进行了进一步考察，结果表明流动相中乙酸铵浓度为20mmo/L时多数化合物色谱峰响应值较高，峰形尖锐，最终选择乙腈一20mm01/L乙酸铵作为流动相进行梯度洗脱。混合标准离子流图详见图1。

2、质谱条件的优化

本实验在EsI模式下，配制合适浓度的待测物通过针泵直接连续进样，根据待测物的化学性质，在负电离模式下优化待测物的母离子和特征子离子以及相应的DP、CE等质谱参数。通过质谱条件优化，3种甜味剂的准分子离子峰以及电离方式为：安赛蜜脱氢（M—H），m/z162；糖精钠脱钠（M—Na），m/z182；甜蜜素脱钠（M—Na），m/z178；6种色素的电离方式为：亮蓝、日落黄、柠檬黄、苋菜红、胭脂红、诱惑红等均为[M—nNa+（n一2）H］型电离，m/z依次为373.2，202.8，225，233.1，268，268；优化后的质谱参数见表1。

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